산물은 점점 많이 존재하게 되므로 cycle 후반부에는 반응시간을 조금씩 늘려가는 것도 좋은 방법의 하나이며 마지막 cycle 에는 약 10분 정도 시간을 충분히 주어서 효소의 활성이 충분히 발휘되도록 한다.
2. 실험재료 및 실험방법
Materials
‣Lysis buffer
-50mM KCl -10mM Tris (pH 8.3)
-2.5mM MgCl2 -0.45% NP
1. 실험목적
: 미생물의 일종인 곰팡이의 형태를 관찰함으로써 다른 미생물과의 차이점을 비교하여 본다.
2. 실험이론
: 곰팡이의 종류
곰팡이는 보통 그 몸이 실처럼 가늘고 긴 모양을 가지고 있으며 균사로 되어 있는 사상균을 가리킨다. 일반적으로는 균류 중에서 세균, 고초균, 버섯 등과 효모
실험 결과가 결정된다. 탈색 정도는 세균 세포벽 구성 성분의 차이에 의해 결정된다. 크리스탈 바이올렛으로 염색 후에는 강한 결합을 위해 아이오딘 용액을 매염제로서 이용해 색이 잘 착색되도록 한다. 이 과정에서 크리스탈 바이올렛과 아이오딘이 반응을 해서 불용성의 복합체를 형성한다. 잘 착색
- 세포 이동을 제어하는 단백질 : mig 17
- 세포의 운명을 결정하는 단백질 : Cki
- 노화조절 메카니즘 : daf-2, daf-16
- 선충을 대상으로 한 연구에서 수컷이 원래 암컷보다 더 오래 살도록 되어 있다는 것
- 선충의 생체 시계 유전자 : clk-1, clk-2, clk-3
- 노화를 억제하는 유전자 발견 : mev-1
위와 같은 연구
실험 방법
◉ 이중 돌연변이 제작
① 두 개의 돌연변이 주를 각각 관찰하여, 수컷과 자웅 동체를 구별한다.
- 웅체의 꼬리 쪽이 자웅동체에 비하여 가늘고 털 같이 보이는 것이 달려있음을 이용하여 현미경으로 관찰하여 구별한다.
② 웅체가 더 많이 존재하는 돌연변이 주를 선택하여, 웅체만
, 단백질의 경우 degradation이 발생해 분리될 수가 있다는 점을 고려해볼 수 있다. 즉, 하나의 단백질이 degradation이 발생해 분리되어 두 개의 밴드가 나타났다고 볼 수 있는 것이다. 그렇다면 둘 중에 어떤 밴드가 분해된 단백질을 나타내는 것일까? 64kDa 부근의 밴드가 분해된 (후략)
3. 실험 방법
◉ protein 준비
1) plate에서 S media 1ml로 worm을 모은 다음 2~3회 워싱 한다.
2) ice에서 20분간 bacteria가 모두 소화 될 수 있도록 한다.
- ice에서 하는 이유는 worm의 필요 없는 활동은 가능한 억제한 채로, 소화만 이루어질 수 있도록 하기 위함.
3) 5000g에서 30초간 centrifuge 한 후, worm만 남
2. 실험재료 및 실험방법
Materials
-S medium(선충이 크는데 필요한 영양소가 모두 갖추어진 액체배지이다.)
-NGM media(고체배지)
-Sample "T": 1mg/ml(이것은 타우린으로 바카스 안에 들어있는 성분이다. 피로를 쌓이지 않게 해주어 활동성을 증가시켜준다.
Method
Sample stock(1mg/1ml)을 S mediu
실험으로 샘플농도를 일정히 맞추어 주기위해!!)
-Blank:2㎕ 1X SDS buffer
-Standards : protein solution(1,2,4,8,16) +2㎕ 1X SDS buffer
-Sample: 2㎕ sample
protein sample 제작 (protein + 1X SDS buffer + 4+dye) (dye는 SDS가 포함된 파란색 염색물질로서 눈으로 얼만큼 전기영동이 잘 일어났는지 볼 수 있도록 한다.)
Sample을
그림 3] 원본사진
B.
위의 사진이 실험결과 최종적으로 나온 gel 사진이다. 아래 gel(왼쪽 모서리가 잘려있는 gel)이 2조의 결과물이며, 육안으로 밴드가 잘 보이지 않고, 7번 레인과 8번 레인에 있어야 할 밴드가 보이지 않아 사진의 contrast등의 조절을 통하여 보정을 해보았다.
C. 보정 후 사진
보정된 사